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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811225692.4 (22)申请日 2018.10.21 (71)申请人 上海睿璟生物科技有限公司 地址 201100 上海市闵行区召楼路3632号2 幢5层 (72)发明人 金安娜高伙妮包文静龚伟 (51)Int.Cl. C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种磁珠法口腔拭子基因组 DNA提取试剂盒， 属于基因组DNA提取领域， 所述 磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒包括： 。
2、裂 解液以及磁珠， 裂解液组成成分为： 20-100mmol/ L的盐酸胍、 10-50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲 溶液、 50-250mmol/L的KCl溶液、 10-100mmol/L的 PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1- 1SDS亲水基表面活性剂， 所述的磁珠法口腔拭 子基因组DNA提取试剂盒解决了目前技术中采用 酚氯仿、 柱提法等方法从口腔拭子中提取DNA过 程存在酚氯仿污染、 DNA得率低、 纯度差的问题， 所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒提取 口腔拭子样本中的基因组DNA， 片段完整度高， 产 物浓度和纯度高， 提取的DNA可用于PCR扩增以及。
3、 荧光定量PCR等实验， 值得推广。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 109234271 A 2019.01.18 CN 109234271 A 1.一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒， 其包括： 裂解液以及磁珠， 其特征在于： 所述裂解液组成成分为： 20-100mmol/L的盐酸胍、 10-50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、 50-250mmol/L的KCl溶液、 10-100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1- 1SDS亲水基表面活性剂。 2.根据权利要求1所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒， 其特征在于： 所 述。
4、裂解液组成成分为： 30-90mmol/L的盐酸胍、 20-40mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、 60- 240mmol/L的KCl溶液、 20-90mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.2-0.9 SDS亲水基表面活性剂。 3.一种如权利要求1-2任一所述的磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法， 其特征在于包括以下步骤： 口腔拭子取样品、 裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移 至离心管、 蛋白酶K消化、 磁珠纯化、 75乙醇溶液洗涤以及含Nuclease free water的低盐 缓冲液洗脱。 4.根据权利要求3所述的一种磁珠法口腔拭子基因组。
5、DNA提取试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 所述口腔拭子取样品实施方式为： 将在口腔内擦拭过的拭子或者棉签转置于1.5mL 的离心管中， 将拭子剪下或者使其脱落； 所述裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移 至离心管实施方式为： 往装有口腔拭子样品中的离心管中加入300uL裂解液， 震荡混匀离 心， 将液体转移至新的1.5mL离心管中得混合液一。 5.根据权利要求4所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 所述蛋白酶K消化实施方式为： 往混合液一中加入10uL蛋白酶K， 吹打混匀， 在56， 800rpm的转速的条件下孵育30min得混合液二； 所述磁珠纯化。
6、实施方式为： 混合液二室温放 置5min后， 12000rpm离心转速条件下离心2min， 将200uL上清液转移至含100uL结合磁珠的 1.5mL离心管中， 涡旋混匀， 室温静置孵育5min， 短离， 将离心管置于磁力架上至溶液澄清。 6.根据权利要求5所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 所述75乙醇溶液洗涤实施方式为： 移除上清液， 向离心管中加入500uL 75乙醇 溶液， 剧烈Vortex， 磁力架上30s， 重复该步骤一次， 即75乙醇溶液洗涤步骤实施两次， 短 离， 使用移液器移除底部残留乙醇溶液， 室温静置2-5min， 至磁珠不反光。 。
7、7.根据权利要求6所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 所述含Nuclease free water低盐缓冲液洗脱实施方式为： 加入20-50uL的含 Nuclease free water低盐缓冲液， 把离心管从磁力架取下， 重悬磁珠， 室温静置5min， 将离 心管置于磁力架上2min， 用移液器吸取上清液， 转移到新的1.5ml离心管中。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109234271 A 2 一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒 技术领域 0001 本发明涉及基因组DNA提取领域， 具体是一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂 盒。 背景。
8、技术 0002 人口腔黏膜由多层细胞组成， 具有代谢快、 易脱落、 DNA完整的特点， 因此， 运用口 腔拭子采集口口腔脱落细胞DNA过程简单、 无痛、 无创。 该方法适用于不同年龄段人群的DNA 样本采集， 也适用不便采血的人群采集DNA。 0003 传统方法中多采用酚氯仿、 Chelex-100、 柱提法等方法从口腔拭子中提取DNA， 该 过程存在酚氯仿污染、 DNA得率低、 纯度差或者操作繁琐， 用时长等缺点， 严重影响了医护人 员了解患者病况的效率。 0004 针对上述背景技术中提出的问题， 本发明旨在提供一种磁珠法口腔拭子基因组 DNA提取试剂盒。 发明内容 0005 本发明的目的在。
9、于提供一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒， 以解决上述 背景技术中提出的目前传统方法中采用酚氯仿、 Chelex-100、 柱提法等方法从口腔拭子中 提取DNA过程存在酚氯仿污染、 DNA得率低、 纯度差或者操作繁琐， 用时长的问题。 0006 为实现上述目的， 本发明提供如下技术方案： 0007 一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒， 其包括： 高效的裂解液以及独特的结 合磁珠， 其中： 裂解液组成成分为： 20-100mmol/L的盐酸胍、 10-50mmol/L的PH为8.0的Tris 缓冲溶液、 50-250mmol/L的KCl溶液、 10-100mmol/L的PH为8.0的。
10、EDTA螯合剂以及体积含量 为0.1-1SDS亲水基表面活性剂。 0008 所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒使用方法包括以下步骤： 口腔拭子取 样品、 裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管、 蛋白酶K消化、 磁珠纯化、 75 乙醇溶液洗涤以及含Nuclease free water低盐缓冲液洗脱。 0009 作为本发明进一步的方案： 所述口腔拭子取样品实施方式为： 将在口腔内擦拭过 的拭子或者棉签转置于1.5mL的离心管中， 将拭子剪下或者使其脱落； 所述裂解液洗脱拭子 上细胞并将含细胞液体转移至离心管实施方式为： 往装有口腔拭子样品中的离心管中加入 300uL裂解液， 震荡。
11、混匀离心， 将液体转移至新的1.5mL离心管中得混合液一。 0010 作为本发明再进一步的方案： 所述蛋白酶K消化实施方式为： 往混合液一中加入 10uL蛋白酶K， 吹打混匀， 在56， 800rpm的转速的条件下孵育30min得混合液二； 所述磁珠 纯化实施方式为： 混合液二室温放置5min后， 12000rpm离心2min， 将200uL上清转移至含 100uL结合磁珠的1.5mL离心管中， 涡旋混匀， 室温静置孵育5min， 短离， 将离心管置于磁力 架上至溶液澄清。 0011 作为本发明更进一步的方案： 所述75乙醇溶液洗涤实施方式为： 移除上清， 向离 说明书 1/3 页 3 CN 。
12、109234271 A 3 心管中加入500uL75乙醇溶液， 剧烈Vortex， 磁力架上30s， 重复该步骤一次， 即75乙醇 溶液洗涤步骤实施两次， 短离， 使用移液器移除底部残留乙醇溶液， 室温静置2-5min， 至磁 珠不反光； 所述含Nuclease free water低盐缓冲液洗脱方式为： 加入20-50uL的低盐缓冲 液， 把离心管从磁力架取下， 重悬磁珠， 室温静置5min， 将离心管置于磁力架上2min， 用移液 器吸取上清液， 转移到新的1.5ml离心管中。 0012 与现有技术相比， 本发明的有益效果是： 0013 所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒设计合。
13、理， 样本(口腔拭子)通 过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化， 将DNA释放到裂解液中， 加入独特的磁珠 (已含特定的反应体系)使其与DNA特异性结合。 在一定比例的乙醇溶液中， 将该体系中的蛋 白质和其余杂质去除， 只留下磁珠上结合的DNA， 最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗 脱， 得到的DNA可用于后续实验。 0014 所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒实用性强， 其适用于提取口腔 拭子样本的基因组DNA， 其A260/280大于1.8， 片段完整度高； 提取的整个过程不涉及有毒有 害试剂， 操作过程安全， 全程仅需60分钟即可完成高质量DNA的提取， 方便便捷快。
14、速稳定； 高 效的裂解液体系及独特的磁珠相匹配， 操作用时短， 产物浓度和纯度高， 提取的DNA可用于 高通量测序实验、 酶切、 PCR扩增、 荧光定量PCR等实验。 0015 所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒值得在口腔拭子样本的基因组 DNA提取领域推广与使用。 附图说明 0016 图1为一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法流程图。 具体实施方式 0017 下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。 0018 实施例 0019 请参阅图1， 一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒， 其包括： 高效的裂解液以 及独特的结合磁珠， 其中， 裂解液组成。
15、成分为： 20-100mmol/L的盐酸胍、 10-50mmol/L的PH为 8.0的Tris缓冲溶液、 50-250mmol/L的KCl溶液、 10-100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及 体积含量为0.1-1SDS亲水基表面活性剂。 0020 所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒使用方法包括以下步骤： 口腔拭子取 样品、 裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管、 蛋白酶K消化、 磁珠纯化、 75 乙醇溶液洗涤以及Nuclease free water/低盐缓冲液洗脱。 0021 所述口腔拭子取样品实施方式为： 将在口腔内擦拭过的拭子或者棉签转置于 1.5mL的离心。
16、管中， 将拭子剪下或者使其脱落。 0022 所述裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管实施方式为： 往装有口 腔拭子样品中的离心管中加入300uL裂解液， 震荡混匀离心， 将液体转移至新的1.5mL离心 管中(约200mL)得混合液一。 0023 所述蛋白酶K消化实施方式为： 往混合液一中加入10uL蛋白酶K， 吹打混匀， 在56 ， 800rpm的转速的条件下孵育30min得混合液二。 说明书 2/3 页 4 CN 109234271 A 4 0024 所述磁珠纯化实施方式为： 混合液二室温放置5min后， 12000rpm离心2min， 将 200uL上清转移至含100uL结合磁珠。
17、的1.5mL离心管中， 涡旋混匀， 室温静置孵育5min， 短离， 将离心管置于磁力架上至溶液澄清。 0025 所述75乙醇溶液洗涤实施方式为： 移除上清， 向离心管中加入500uL 75乙醇 溶液， 剧烈Vortex， 磁力架上30s， 重复该步骤一次， 即75乙醇溶液洗涤步骤实施两次， 短 离， 使用移液器移除底部残留乙醇溶液， 室温静置2-5min， 至磁珠不反光。 0026 所述含Nuclease free water低盐缓冲液洗脱方式为： 加入20-50uL的含Nuclease free water低盐缓冲液， 把离心管从磁力架取下， 重悬磁珠， 室温静置5min， 将离心管置于 磁。
18、力架上2min， 用移液器吸取上清液， 转移到新的1.5ml离心管中。 0027 对比例 0028 使用商品化的柱提法提取口腔拭子基因组DNA， 与实施例提供的磁珠法提取口腔 拭子基因组DNA方法相比， 所述商品化的柱提法提取口腔拭子基因组DNA操作相对复杂， 且 不便于自动化操作， 而且提取的口腔拭子基因组DNA浓度不够， 纯度较低。 0029 本发明的工作原理为： 0030 样本(口腔拭子)通过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化， 将DNA释放到 裂解液中， 加入独特的磁珠(已含特定的反应体系)使其与DNA特异性结合。 在一定比例的乙 醇溶液中， 将该体系中的蛋白质和其余杂质去除， 。
19、只留下磁珠上结合的DNA， 最后DNA在水溶 液或低盐缓冲液中进行洗脱， 得到的DNA可用于后续实验。 0031 所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒设计合理， 其提取口腔拭子样 本的基因组DNA， 其A260/280大于1.8， 片段完整度高， 提取的整个过程不涉及有毒有害试 剂， 操作过程安全， 全程仅需60分钟即可完成高质量DNA的提取， 方便便捷快速稳定， 而且操 作用时短， 产物浓度和纯度高， 提取的DNA可用于高通量测序实验、 酶切、 PCR扩增、 荧光定量 PCR等实验， 所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒值得在口腔拭子样本的基因 组DNA提取领域推广与使用。 0032 上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明， 但是本发明并不限于上述实施方 式， 在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内， 还可以在不脱离本发明宗旨的前提下 作出各种变化。 说明书 3/3 页 5 CN 109234271 A 5 图1 说明书附图 1/1 页 6 CN 109234271 A 6 。