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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811149201.2 (22)申请日 2018.09.29 (83)生物保藏信息 CCTCC NO： M 2018545 2018.08.17 (71)申请人 河南省农业科学院植物保护研究所 地址 450002 河南省郑州市金水区花园路 116号 (72)发明人 刘红彦文艺千慧敏赵辉 刘玉霞李小杰李淑君倪云霞 刘新涛李成军 (74)专利代理机构 郑州市华翔专利代理事务所 (普通合伙) 41122 代理人 张爱军徐文婷 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.。
2、01) C12N 1/02(2006.01) A01N 63/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C12R 1/38(2006.01) (54)发明名称 一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病 且具有促生作用的格拉纳达假单胞菌及其应用 (57)摘要 本发明公开了一株能够同时防治烟草黑胫 病和根黑腐病且具有促生作用的格拉纳达假单 胞菌及其应用， 所述的格拉纳达假单胞菌为格拉 纳达假单胞菌(Pseudomonasgranadensis) PF3402， 已保藏于中国典型培养物保藏中心， 保 藏地址： 武汉市武昌珞珈山， 保藏编号： C。
3、CTCCM 2018545， 保藏日期： 2018年08月17日。 本发明通 过平板对峙抑菌、 防病和盆栽促生实验， 首次从 阿尔山上的土壤中筛选出能够同时防治烟草黑 胫病和根黑腐病的生防菌PF3402， 经鉴定该菌株 为格拉纳达假单胞菌， 同时该菌株还具有促进烟 苗生长的作用。 试验表明， 本发明的PF3402对烟 草黑胫病和根黑腐病的病原菌均具有良好的抑 制作用， 对两种烟草病害的防效均能达到60以 上。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 109136154 A 2019.01.04 CN 109136154 A 1.一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用。
4、的格拉纳达假单胞菌， 其 特征在于， 所述的格拉纳达假单胞菌为格拉纳达假单胞菌(Pseudomonas granadensis) PF3402， 已保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏地址： 武汉市武昌珞珈山， 保藏编号： CCTCC NO： M 2018545， 保藏日期： 2018年08月17日。 2.一种如权利要求1所述的格拉纳达假单胞菌的筛选方法， 其特征在于， 采集内蒙古阿 尔山上的土壤， 称取1g土壤， 加入10ml无菌水中充分振荡获得土壤悬浮液， 然后将土壤悬浮 液摇匀后进行稀释， 取0.1ml稀释液涂布于含8-羟基喹啉的KB固体培养基上， 28培养， 至 菌落长出后分离纯化， 。
5、然后筛选出对烟草疫霉和根串珠霉具有抑制效果的菌株， 并鉴定， 得 到格拉纳达假单胞菌PF3402。 3.一种如权利要求1所述的格拉纳达假单胞菌在同时防治烟草黑胫病和根黑腐病方面 的应用。 4.一种如权利要求1所述的格拉纳达假单胞菌在促进烟草生长方面的应用。 5.一种如权利要求1所述的格拉纳达假单胞菌在同时防治烟草黑胫病和根黑腐病并促 进烟草生长方面的应用。 6.一种如权利要求1所述的格拉纳达假单胞菌在制备同时防治烟草黑胫病和根黑腐 病， 和/或， 促进烟草生长的菌剂中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 菌剂的制备方法为： 将格拉纳达假单胞菌 接种于KB培养基中， 在28、 。
6、180rpm条件下振荡培养16h制备种子菌， 种子菌以3的接种量 接种于KB培养基中， 在28、 180rpm条件下发酵48h， 形成发酵液， 即为菌剂； 发酵液中格拉 纳达假单胞菌活菌浓度为1091010CFU/ml。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， KB培养基为： 蛋白胨20g， 甘油10ml， 磷酸氢 二钾1.5g， 七水合硫酸镁1.5g， 添加蒸馏水定容至1000ml， 混匀后分装于三角瓶中， 121灭 菌30min。 9.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 菌剂的使用方法为： 菌剂用无菌水稀释10 倍， 使稀释液活菌浓度为108109CFU/ml， 灌根于烟草根部。
7、周围； 每3d灌根处理1次， 共灌根3 次。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109136154 A 2 一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用的 格拉纳达假单胞菌及其应用 技术领域 0001 本发明涉及一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用的格拉纳 达假单胞菌、 筛选方法及其应用， 属于微生物技术领域。 背景技术 0002 烟草是我国主要经济作物之一， 是植烟地区收入的重要来源， 现已发现其具有较 大的药用和保健价值， 且能够作为生物科学最佳的模式材料。 但烟草病害制约着烟草的健 康生长， 尤其是烟草黑胫病、 烟草根黑腐病等土传病害的发生会造成烟草减产， 发病严重时。
8、 会造成毁灭性的损失。 0003 烟草黑胫病是烟草生产上危害最严重的土传病害之一， 病原物为烟草疫霉 (Phytophthora nicotianae)。 该病害多发生于大田成株期， 症状主要有 “黑胫” 、“穿大褂” 、 “黑膏药” 、“碟片状” 、“腰烂” ， 烟草黑胫病属高温高湿型病害， 相对湿度高时田间会出现发 病高峰， 严重时能够造成整株成片死亡。 0004 烟草根黑腐病是世界性的烟草病害， 也是我国烟草主要病害之一， 其病原物为根 串珠霉菌(Thielaviopsis basicola)。 根黑腐病主要发生在烟草根部， 幼苗染病时可引起 “猝倒” ， 使整株烟苗毁坏； 较大烟株染病。
9、则病株叶片变黄、 变薄， 极大的影响烟草产量和品 质， 严重发生时可导致烟田绝收。 0005 随着国内烟草种植面积扩大， 连作烟田的增多， 烟草黑胫病和烟草根黑腐病等土 传病害的危害不断加重， 在部分烟区已成为影响烟草发展的主要病害。 生产上烟田防治土 传病害多以化学防治为主， 农药的长期使用容易产生环境污染、 农药残留和耐药病原菌等 问题。 0006 生物防治在烟草土传病害控制方面已经受到学者的重视， 有关烟草黑胫病和根黑 腐病生防菌的筛选及其菌剂和应用已被广泛研究。 我国已公开的对烟草黑胫病有效的生防 菌株主要有枯草芽孢杆菌、 沙福芽孢杆菌、 短短芽孢杆菌、 青霉菌和淡紫拟青霉等几类， 而。
10、 对烟草根黑腐病有效的生防菌较少， 且能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病这两种容易混 合发生的生防菌株则更少， 因此筛选对这两种病害同时有效且对烟草有促生作用的生防菌 株具有重要的理论和实践意义。 发明内容 0007 针对现有技术的不足， 本发明的目的是提供一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑 腐病且具有促生作用的格拉纳达假单胞菌、 筛选方法和应用， 该格拉纳达假单胞菌能够同 时防治烟草黑胫病和根黑腐病， 且能促进烟苗生长。 0008 为了实现上述目的， 本发明所采用的技术方案是： 0009 一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用的格拉纳达假单胞菌， 所述的格拉纳达假单胞菌为格拉纳达假单。
11、胞菌(Pseudomonas granadensis)PF3402， 已保 说明书 1/6 页 3 CN 109136154 A 3 藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏地址： 武汉市武昌珞珈山， 保藏编号： CCTCC NO： M 2018545， 保藏日期： 2018年08月17日。 0010 一种能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用的格拉纳达假单胞菌 的筛选方法， 采集内蒙古阿尔山上的土壤， 称取1g土壤， 加入10ml无菌水中充分振荡获得土 壤悬浮液， 然后将土壤悬浮液摇匀后进行稀释， 取0.1ml稀释液涂布于含8-羟基喹啉的KB固 体平板上， 28培养， 至菌落长出后分离纯化。
12、， 然后筛选出对烟草疫霉和根串珠霉具有抑制 效果的菌株， 并鉴定， 得到格拉纳达假单胞菌PF3402。 0011 一种格拉纳达假单胞菌在同时防治烟草黑胫病和根黑腐病方面的应用。 0012 一种格拉纳达假单胞菌在促进烟草生长方面的应用。 0013 一种格拉纳达假单胞菌在同时防治烟草黑胫病和根黑腐病并促进烟草生长方面 的应用。 0014 一种格拉纳达假单胞菌在制备同时防治烟草黑胫病和根黑腐病， 和/或， 促进烟草 生长的菌剂中的应用。 0015 菌剂的制备方法为： 将格拉纳达假单胞菌接种于KB培养基中， 在28、 180rpm条件 下振荡培养16h制备种子菌， 种子菌以3的接种量接种于KB培养基中。
13、， 在28、 180rpm条件 下发酵48h， 形成发酵液， 即为菌剂； 发酵液中格拉纳达假单胞菌活菌浓度为109 1010CFU/ ml。 0016 KB培养基为： 蛋白胨20g， 甘油10ml， 磷酸氢二钾1.5g， 七水合硫酸镁1.5g， 添加蒸 馏水定容至1000ml， 混匀后分装于三角瓶中， 121灭菌30min。 0017 菌剂的使用方法为： 菌剂用无菌水稀释10倍， 使稀释液活菌浓度为108109CFU/ ml， 灌根于烟草根部周围； 每3d灌根处理1次， 共灌根3次。 0018 本发明有益效果： 0019 本发明的目的是生物防治烟草黑胫病和烟草根黑腐病等2种烟草主要病害， 因此。
14、 本发明通过平板对峙抑菌、 防病和盆栽促生实验， 首次从阿尔山上的土壤中筛选出能够同 时防治烟草黑胫病和根黑腐病的生防菌PF3402， 经鉴定该菌株为格拉纳达假单胞菌 (Pseudomonas granadensis)， 同时该菌株还具有促进烟苗生长的作用。 试验表明， 本发明 的格拉纳达假单胞菌对烟草黑胫病和根黑腐病的病原菌均具有良好的抑制作用， 对两种烟 草病害的防效均能达到60以上， 能够有效降低烟草根茎病害的发病率， 其效果与现有的 常用化学农药相似。 本发明筛选的格拉纳达假单胞菌使用后不会产生抗药性、 农药残留、 环 境污染等化学农药常见问题， 对人畜健康、 环境友好， 符合人们对生。
15、态农业的需求。 附图说明 0020 图1为菌株PF3402对烟草疫霉和根串珠霉的平板对峙抑菌试验结果。 0021 图2为菌株PF3402的菌落形态。 图左为对照， 图右为PF3402处理。 0022 图3为菌株PF3402对烟叶过敏性试验结果。 图左为阳性对照， 图右为菌株PF3402。 0023 图4为菌株PF3402对烟草盆栽促生试验结果。 图左为接种KB培养基， 图右为接种菌 株 PF3402。 说明书 2/6 页 4 CN 109136154 A 4 具体实施方式 0024 以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。 0025 实验材料： 0026 KB培养基： 蛋白胨20。
16、g， 甘油10ml， 磷酸氢二钾1.5g， 七水合硫酸镁1.5g， 琼脂20g (仅做固体培养基时添加)， 添加蒸馏水定容至1000ml， 混匀后分装于三角瓶中， 121灭菌 30min。 0027 PDA培养基： 马铃薯200g(切成边长约1cm的小块， 放入800ml蒸馏水煮沸15min， 双 层纱布过滤后留取滤液)， 葡萄糖20g， 琼脂20g， 加蒸馏水定容至1000ml， 121灭菌30min。 0028 菌谷培养基： 将谷子浸泡6h后用清水洗净， 淘尽瘪空壳谷粒， 煮至谷粒炸开成半开 花状， 冷却至半干， 分装入500ml三角瓶中高压灭菌1h(115)， 备用。 装入的谷粒量以不超。
17、 过500ml刻度线为宜。 0029 本发明所用病原菌及其它原料、 试剂均可由市场购得。 0030 实施例1、 生防菌的分离 0031 在内蒙古阿尔山上采集种植烟草的根际土壤， 称取1g土壤， 加入10ml无菌水中充 分振荡获得土壤悬浮液， 然后将土壤悬浮液摇匀后做适当稀释(可进行倍比稀释)， 取0.1ml 稀释液涂布于含8-羟基喹啉(0.05g/L)的KB固体培养基上， 于28恒温培养箱中倒置培养 36h， 至菌落长出， 挑取大小、 颜色或形态不同的菌落在KB固体培养基表面划线分离纯化， 获 得4株菌株， 并分别命名为PF3402、 PG3403、 PG3101和PG3105。 0032 实。
18、施例2、 生防菌的筛选 0033 利用平板对峙方法筛选生防菌： 将烟草黑胫病病原疫霉和根黑腐病原根串珠霉接 种在 PDA培养基上， 分别于25、 28条件下培养510d， 用灭过菌的打孔器将病原菌菌落 打成直径为5mm的圆形菌丝块。 将病原菌菌块(烟草根串珠霉与烟草疫霉)与分离菌株接入 PDA培养基上， 病原菌菌块与分离菌株相距20mm， 同时设置单独接种病原菌菌块作为对照。 每处理3次重复， 1周后检查对峙培养结果， 结果见表1， 其中PF3402对2株病原菌均有最高的 抑菌率。 0034 表1阿尔山土壤分离的4株菌株对烟草疫霉和根串珠霉的抑菌结果 0035 0036 分离菌株发酵滤液抑菌活。
19、性测定： 取培养24h的菌株PF3402， 接入100ml KB培养 液， 于28、 180rpm摇瓶发酵2d， 离心后留滤液， 用微孔滤膜过滤2次(4下保存)， 然后配制 含滤液300ml/l的PDA平板， 在每板中央接入5mm病原菌菌块1个， 于28恒温培养， 5d后观 察结果。 0037 结果表明， PF3402对烟草疫霉和根串珠霉均有较好的抑制效果(图1)。 0038 实施例3、 生防菌鉴定 0039 菌株形态及生理生化： PF3402革兰氏染色阴性， 在KB培养基上， 28培养48h的菌 说明书 3/6 页 5 CN 109136154 A 5 落形态圆形凸起， 表面光滑湿润， 乳黄。
20、色、 半透明， 挑起菌落粘稠， 培养基上有可扩散的荧光 颜料(仅紫外UV2上可见)(图2)。 5能够生长， 41不能生长。 氧化酶、 精氨酸二水解酶和明 胶液化阳性， 不能水解淀粉， 硝酸盐还原和反硝化试验、 甲基红和VP试验均为阴性。 0040 测序： 对菌株PF3402进行测序， 鉴定结果为格拉纳达假单胞菌(Pseudomonas granadensis)。 0041 16SrDNA基因测序结果为： 0042 AGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGT CGAGCGGATGAG AGGAGCTTGCTCCTGGATTCAG。
21、CGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTA GGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGT TTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGT CCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATG AGCCTAGGTCGG ATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGTTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGA GGAT GATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGT GGGGAATATTGGACAATGGGC GAAAGCCTGATCCA。
22、GCCATGCCGCGTGTGTGAAGAA GGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGG GTTGTAGATTAATACTCTGC AATTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCG GTA ATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTT CGTTAAGTTGGAT GTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCAAAACTGTCG AGCTAGAGTAAGGTAGAGGGTGGTGGAATT TCCTGT。
23、GTAGCGGTGAAATGCGTAGATA TAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGA CACTGAGGTG CGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGAT GTCAACT AGCCGTTGGGAGCCTTGAGCTCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTGA CCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAG GTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCAC AAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAG。
24、A ACCTTACCAGGCCTTGA CATCCAATGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACATTGAGACAGGTGCT GCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCA ACCCTTGTCCTTAGTTA CCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGAC AAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTAC ACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGC。
25、GAGGTGGAG CTAATCCC ATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATC GCTAGTAA TCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACC GCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTT GCACCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGAGG ACGGTTACCACGGTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAA CAAGGTAACC(SEQ ID NO.1) 0043 实施例4、 生防菌对烟叶过敏性试验 0044 将在28条件下。
26、， 培养24h菌龄的格拉纳达假单胞菌PF3402， 用10mM MgSO4配成107 108CFU/ml(OD600在0.30.5)的菌液， 对烟草下表皮进行皮下接种， 在24， 60-80 的高湿度条件下， 经24-48h后出现过敏性坏死枯斑的为阳性反应， 3d后出现黄斑的为阴性 反应， 以10mM MgSO4为阴性对照， 以烟草野火菌为阳性对照(YH)。 0045 结果发现， 格拉纳达假单胞菌PF3402过敏性试验为阴性反应， 因此格拉纳达假单 胞菌 PF3402无致病性， 可作为烟草土传病害的生防菌(图3)。 0046 实施例5、 生防菌的防病试验 0047 格拉纳达假单胞菌PF3402。
27、发酵液的制备方法为： 将格拉纳达假单胞菌PF3402接种 于 KB培养基中， 在28、 180rpm条件下振荡培养16h制备种子菌， 种子菌以3的接种量接 种于KB培养基中， 在28、 180rpm条件下发酵48h， 形成发酵液； 发酵液中格拉纳达假单胞菌 活菌浓度为1091010CFU/ml。 使用时， 用无菌水10倍稀释发酵液， 稀释液活菌浓度为 108 说明书 4/6 页 6 CN 109136154 A 6 109CFU/ml。 0048 取长势一致的56片真叶烟苗移栽于装有灭菌土与基质的体积比3:1的花盆中， 每盆1 株。 采用灌根法接种格拉纳达假单胞菌PF3402。 缓苗3d后， 。
28、用少量清水湿润土壤， 后 用移液枪头将格拉纳达假单胞菌PF3402发酵液灌入烟株根际， 8ml/株， 并取2ml发酵液淋于 茎基部， 之后每3d灌根1次， 共灌根3次； 对照组同样方法接入等量KB培养基(CK)。 另外， 设置 药剂阳性对照组， 烟草黑胫病药剂对照为58甲霜灵锰锌可湿性粉剂500倍稀释液， 烟草根 黑腐病药剂对照为70甲基硫菌灵1000倍稀释液， 每株烟苗15ml， 第1次灌根7d之后再灌根 1次， 共灌根2次。 在各组最后一次灌根1d后分别接种黑胫病病原疫霉和根黑腐病病原根串 珠霉。 疫霉接种方法： 先用手术刀划伤烟苗茎基部， 造成苗茎基部受伤， 然后接种烟草黑胫 病病原菌菌。
29、丝(将保存的烟草黑胫病菌丝接入PDA平板上培养， 57d后转入菌谷培养基上 培养1820d备用)， 接种量为5g/株； 根黑腐病病原根串珠霉接种方法： 灌根接种， 取5ml根 黑腐病病原菌孢子悬浮液(浓度为1106个/ml)对烟苗进行灌根接种。 接种病原菌后立即 覆土保湿， 每天早晚各浇一次水， 置于2528温室中培养， 定期观察烟苗的发病情况。 培 养30d后调查、 计算发病率、 病情指数和防治效果。 烟草根茎病害分级标准参照国家标准 (GB/T23222-2008)进行， 结果见表2、 3。 0049 结果表明， 格拉纳达假单胞菌PF3402对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为 66.67和。
30、 60.00。 0050 表2格拉纳达假单胞菌PF3402对烟草黑胫病的盆栽防病结果 0051 0052 注： 数据中不同小写字母表示差异达到0.05显著水平。 下同。 0053 表3格拉纳达假单胞菌PF3402对烟草根黑腐病的盆栽防病结果 0054 0055 实施例6、 盆栽促生试验 0056 取长势一致的56片真叶烟苗移栽于装有灭菌土与基质的体积比3:1的花盆中， 每盆1 株。 采用灌根法接种生防菌， 灌根前用少量清水湿润土壤， 于根际接种格拉纳达假单 胞菌 PF3402发酵液(活菌浓度为108109CFU/ml)， 每株5ml， 重复接种3次， 间隔为3d， 对照 组同样方法接入等量KB。
31、培养基(CK)。 培养条件(24h)10h光照、 28， 14h黑暗、 23， 75湿 度。 待烟苗长至30d后， 各处理随机选取10株烟苗， 小心将苗整株挖出， 洗去根部泥土， 按烟 草行业标准YC/T 142-1998：烟草农艺性状调查方法 测量并记载各处理烟株株高、 根长、 最大叶面积、 有效叶片数、 根冠比和根活力(表4、 图4)。 0057 结果表明， 格拉纳达假单胞菌PF3402能够促进烟草株高、 根长、 最大叶面积、 有效 说明书 5/6 页 7 CN 109136154 A 7 叶片数的增加， 提高根冠比和根活力， 说明格拉纳达假单胞菌PF3402具有良好的促生作用。 0058。
32、 表4格拉纳达假单胞菌PF3402对烟草的促生分析 0059 0060 以上所述仅为本发明最佳的实施例， 对于本领域的技术人员来说， 本发明可以有 各种更改和变化。 凡在本发明的精神和原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应 包含在本发明的保护范围之内。 说明书 6/6 页 8 CN 109136154 A 8 序列表 河南省农业科学院植物保护研究所 一株能够同时防治烟草黑胫病和根黑腐病且具有促生作用的格拉纳达假单胞 菌及其应用 1 SIPOSequenceListing 1.0 1 1498 DNA 格拉纳达假单胞菌(Pseudomonas granadensis) 1 ag。
33、agtttgat cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60 ggatgagagg agcttgctcc tggattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct 120 gcctggtagt gggggacaac gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga 180 gaaagcaggg gaccttcggg ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt 240 ggtgaggtaa tggttcacca a。
34、ggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca 300 cactggaact gagacacggt ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca 360 atgggcgaaa gcctgatcca gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag 420 cactttaagt tgggaggaag ggttgtagat taatactctg caattttgac gttaccgaca 480 gaataagcac cggctaactc tgtgccagca gccgcggtaa。
35、 tacagagggt gcaagcgtta 540 atcggaatta ctgggcgtaa agcgcgcgta ggtggttcgt taagttggat gtgaaatccc 600 cgggctcaac ctgggaactg cattcaaaac tgtcgagcta gagtaaggta gagggtggtg 660 gaatttcctg tgtagcggtg aaatgcgtag atataggaag gaacaccagt ggcgaaggcg 720 accacctgga ctgatactga cactgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattag。
36、at 780 accctggtag tccacgccgt aaacgatgtc aactagccgt tgggagcctt gagctcttag 840 tggcgcagct aacgcattaa gttgaccgcc tggggagtac ggccgcaagg ttaaaactca 900 aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960 aagaacctta ccaggccttg acatccaatg aactttccag agatggattg gtgccttcgg 1020 gaacattgag a。
37、caggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080 gtcccgtaac gagcgcaacc cttgtcctta gttaccagca cgttatggtg ggcactctaa 1140 ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcat catggccctt 1200 acggcctggg ctacacacgt gctacaatgg tcggtacaaa gggttgccaa gccgcgaggt 1260 ggagctaatc ccataaaacc gatcgt。
38、agtc cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga 1320 agtcggaatc gctagtaatc gtgaatcaga atgtcacggt gaatacgttc ccgggccttg 1380 tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg gttgcaccag aagtagctag tctaaccttc 1440 gggaggacgg ttaccacggt gtgattcatg actggggtga agtcgtaaca aggtaacc 1498 序列表 1/1 页 9 CN 109136154 A 9 图1 说明书附图 1/3 页 10 CN 109136154 A 10 图2 图3 说明书附图 2/3 页 11 CN 109136154 A 11 图4 说明书附图 3/3 页 12 CN 109136154 A 12 。