技术领域
本发明涉及医药化工技术领域，具体涉及一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷规模化制备方法。
背景技术
己糖醛酸是生物体重要组成成分或是生理活性物质的结构单位，如半乳糖醛酸是植物细胞壁结构的必需物质，甘露糖醛酸是海洋褐藻中D-甘露糖醛酸五糖的主要组成单糖，葡萄糖醛酸是硫酸肝素、透明质酸、硫酸软骨素等许多生理活性物质的重要组成成分。在己糖醛酸中，葡萄糖醛酸生物功能研究最为广泛，人肠道中的大肠杆菌利用葡萄糖醛酸糖作为碳源制造相关的生物能，葡萄糖醛酸在人体II级代谢中是促进外源物质如药物和一些内源化合物如激素等消除与外排主要途径，往往以葡糖酸苷的共轭物形式存在，故此，确定、定量和药效评价这些葡萄糖醛酸共轭物已广泛应用于运动用药检测、农残测定、药物开发等领域，尤其是取代苯基葡萄糖醛酸糖苷共轭物的特殊性结构性质，如硝基苯酚等，在酶活性检测与疾病诊断的巨大潜力。然而，尽管半乳糖醛酸糖苷和甘露糖醛酸是分别研究植物细胞壁合成关键调控酶的功能与D-甘露糖醛酸五糖生物活性的重要组成成分，但它们的具体作用机制尚不清楚，与探讨其活性和功能己糖醛酸糖苷工具分子的合成滞后密切有关。
采用现存己糖醛酸化的方法，制备己糖醛酸糖苷衍生物的挑战很大。经对现有技术的文献检索发现，己糖醛酸化研究主要集中在葡萄糖醛酸化，甘露糖醛酸化与甘露糖醛酸化等涉及很少。研究较多葡萄糖醛酸化的方法基本上分为两类，一种酶催化合成法，在温和条件下，利用尿嘧啶5’-二磷酸葡萄糖醛酸转移酶或合成酶的酶活及专一性等属性，一步立体特异性地合成葡萄糖醛酸糖苷，然而，底物特异性和实际考虑限制制备规模，仅停留在毫克级水平，不能满足研发的需要(用于β-葡萄糖醛酸苷合成的大肠杆菌葡糖醛酸工程合成酶，有机通讯，2008，10，1585-1588.)。另一种是化学合成法，一般基于Koenigs-Knorr反应或相似的反应，但由于来源于葡萄糖供体的葡萄糖醛酸低反应活性，致使产率低、副反应多等缺点，且制备过程需要繁琐脱保护操作才释放葡萄糖醛酸糖苷(克级合成ABT-724葡糖苷酸代谢物，有机化学，2006,71，8378-8383.)，在化学合成方法中，选择性地氧化β-D-葡萄糖苷6-位羟基制备葡糖醛酸苷应用较广，但是反应时间长，规模依然未突破毫克级水平(用四甲基哌啶氧化物和次氯酸叔丁基酯改进β-D-葡萄糖苷的合成，四面体通讯，1999，40，1201-1202；)，限制其推广与应用。以葡萄糖醛酸内酯为原料进行葡萄糖醛酸化，剧毒气体叠氮甲烷与对环境不友好的磷化合物的应用，规模化与工业化生产渺茫(快速检测大肠杆菌和大肠菌群试剂盒及其底物的合成方法，中国专利，2002，CN1361288A)。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷规模化制备方法。以己糖醛酸为原料，经乙酰化、选择性脱酰基、甲酯化、溴代、成醚、碱性醇解得取代苄基或取代苯基β-己糖醛酸糖苷。本发明反应条件温和、步骤简单，反应试剂易得，适用较大规模制备取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明研究以己糖醛酸为原料，通过碳酸银催化卤代己糖醛酸偶联不同取代苯酚或不同取代苄醇制备取代苄基或取代芳香基己糖醛酸苷是比较方便方法，可以制备十克级以上的规模，而且该方法具有普适性，对半乳糖醛酸、甘露糖醛酸等己糖醛酸的生物功能研究提供了工具分子与探针。
本发明提供了一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷，结构式如式I所示：
其中，n＝0，1；R为邻、间或对位的氢(H)、硝基(-NO2)、甲氧基(-OCH3)或卤素(-X)。
本发明还提供了一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷的制备方法，具体是：以β-D-己糖醛酸为起始原料，在催化量的硫酸或碘作用下，首先将羟基与羧基乙酰化、选择性脱羧基上乙酰基、甲基化、还原端溴代，所得产物在碳酸银的作用下，与取代苄醇或取代苯酚进行成苷反应，再经氢氧化锂甲醇溶液脱保护、H+型树脂处理后，过滤或离心，浓缩得结构式I所代表化合物。
包括以下步骤：
A、在氮气保护下，将β-D-己糖醛酸溶于乙酸酐中，在催化剂a的催化下，搅拌反应得到1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸乙酸酐；
B.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸乙酸酐溶入混合溶剂中，常温搅拌过夜，得1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸；
C.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸溶入溶剂a中，然后加入碱和碘甲烷或硫酸二甲酯，常温充分搅拌，得1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯；
D.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯溶入溶剂b中，然后滴加33％HBr乙酸溶液，继续搅拌，得2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯；
E.在氮气保护下，在含有碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b的溶剂c中滴加溶有2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯的溶剂c，滴毕，黑暗条件下反应，得到取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷；
F.在氮气保护下，将取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷溶入LiOH甲醇溶液中，充分搅拌反应，然后加入氢离子树脂孵育，过滤或离心，浓缩得取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷。
优选地，步骤A中，所述反应温度为40-60℃，反应时间为1-3小时。
优选地，步骤A中，所述β-D-己糖醛酸包括β-D-葡萄糖醛酸、β-D-半乳糖醛酸、β-D-甘露糖醛酸中的一种。
优选地，步骤B中，所述混合溶剂为水和有机溶剂的混合物；所述有机溶剂选自四氢呋喃、1,4-二-O-六环、乙腈中的至少一种，所述水与有机溶剂的体积比1:1-1:10。
优选地，步骤C中，所述碱选自碳酸钾、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中的至少一种；所述碱、碘甲烷、硫酸二甲酯的加入物质的量分别为1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸的3-5倍当量、3-4倍当量、1-2倍当量；所述搅拌时间为2小时。
优选地，步骤D中，在温度为0℃以下时滴加3-5倍当量的所述33％HBr乙酸溶液；所述搅拌温度为0℃以下，搅拌时间为1-2小时。
优选地，步骤E中，所述碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b、2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯的物质的量的比为2-4:1.05-1.5:0.01-0.02:1；所述反应时间为16-24小时。
优选地，所述含有碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b的溶剂c的制备步骤如下：依次将碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b溶入溶剂c中，加入分子筛，搅拌10min。
优选地，所述取代苯甲醇或取代苯酚的结构式如式II所示：
其中，n＝0，1；R为邻、间或对位的氢(H)、硝基(-NO2)、甲氧基(-OCH3)或卤素(-X)。
优选地，步骤A中，所述催化剂a为浓硫酸或碘，步骤E中，所述催化剂b为碘；步骤C中，所述溶剂a为DMF；步骤D和E中，所述溶剂b和溶剂c均为二氯甲烷。
优选地，步骤F中，所述LiOH的加入物质的量为取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷的4-10倍当量；所述氢离子树脂选自Amberlite IR-120、Dowex50WX。
优选地，步骤F中，所述搅拌反应在常温下进行，反应时间为2-3小时；所述孵育时间为0.5-1小时。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明方法可高选择性地合成取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷，为半乳糖醛酸、甘露糖醛酸等糖苷合成提供新的方向与策略，具有普适性。所述取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷可用于硫酸肝素、硫酸软骨素、透明质酸、D-甘露糖醛酸五糖等合成的前体，或作为相关特异性酶的底物模型化合物以及相关疾病诊断试剂。
(2)本发明方法合成路线适当，方法简单，每步反应收率高，不经柱层析，适合规模化生产。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为本发明的反应路线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
以下实施例提供了一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷，结构式如式I所示：
其中，n＝0，1；R为邻、间或对位的氢(H)、硝基(-NO2)、甲氧基(-OCH3)或卤素(-X)。
以下实施例还还提供了一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷的制备方法，反应路线图如图1所示，包括以下步骤：
A、在氮气保护下，将β-D-己糖醛酸溶于乙酸酐中，在催化剂a的催化下，搅拌反应得到1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸乙酸酐；
B.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸乙酸酐溶入混合溶剂中，常温搅拌过夜，得1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸；
C.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸溶入溶剂a中，然后加入碱和碘甲烷或硫酸二甲酯，常温充分搅拌，得1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯；
D.在氮气保护下，将1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯溶入溶剂b中，然后滴加33％HBr乙酸溶液，继续搅拌，得2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯；
E.在氮气保护下，在含有碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b的溶剂c中滴加溶有2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯的溶剂c，滴毕，黑暗条件下反应，得到取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷；
F.在氮气保护下，将取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷溶入LiOH甲醇溶液中，充分搅拌反应，然后加入氢离子树脂孵育，过滤或离心，浓缩得取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷。
步骤A中，所述反应温度为40-60℃，反应时间为1-3小时。所述温度低于40℃，反应时间长，反应不易彻底；温度高于60℃，杂质增多，。
步骤A中，所述β-D-己糖醛酸包括β-D-葡萄糖醛酸、β-D-半乳糖醛酸、β-D-甘露糖醛酸中的一种。
步骤B中，所述混合溶剂为水和有机溶剂的混合物；所述有机溶剂选自四氢呋喃、1,4-二-O-六环、乙腈中的至少一种，所述水与有机溶剂的体积比1:1～1:10，若大于1:1反应，反应物溶解不好，不利于反应进行；小于1:10，则反应时间太大延长。
步骤C中，所述碱选自碳酸钾、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中的至少一种。本发明采用的碱的作用是促进己糖醛酸成盐，增强其与甲基化试剂反应，若采用强碱会破坏己糖中的乙酰基，副反应增加。
所述碱、碘甲烷、硫酸二甲酯的加入量分别为1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸的3-5倍当量、3-4倍当量、1-2倍当量；所述搅拌时间为2小时。
步骤D中，在温度为0℃以下时滴加3～5倍当量的所述33％HBr的乙酸溶液；所述搅拌温度为0℃以下，搅拌时间为1-2小时。
步骤E中，所述碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b、2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-溴代己糖醛酸甲酯的物质的量的比为2-4:1.05-1.5:0.01-0.02:1；所述反应时间为16-24小时。所述碳酸银可提供自由基，与溴原子反应生成溴化银沉淀，有利于反应向生成物方向进行。
所述含有碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b的溶剂c的制备步骤如下：依次将碳酸银、取代苯甲醇或取代苯酚、催化剂b溶入溶剂c中，加入分子筛，搅拌10min。
优选地，所述取代苯甲醇或取代苯酚的结构式如式II所示：
其中，n＝0，1；R为邻、间或对位的氢(H)、硝基(-NO2)、甲氧基(-OCH3)或卤素(-X)。
步骤A中，所述催化剂a为浓硫酸或碘，步骤E中，所述催化剂b为碘；步骤C中，所述溶剂a为DMF；步骤D和E中，所述溶剂b和溶剂c均为二氯甲烷。
步骤F中，所述LiOH的加入量为取代苄基或取代苯基-三-O-乙酰基-β-D-己糖醛酸甲酯糖苷的4-10倍当量；所述氢离子树脂选自Amberlite IR-120、Dowex 50WX。
步骤F中，所述搅拌反应在常温下进行，反应时间为2-3小时；所述孵育时间为0.5-1小时。
在以上条件下均可实现取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷的制备。
实施例1
本实施例提供了一种取代苄基或取代苯基β-D-己糖醛酸糖苷的制备方法，其反应式如下所示：
具体步骤如下：
1)1,2,3,4-四-O-乙酰基葡萄糖醛酸乙酸酐(2)的制备
在氮气保护下，20克β-D-葡萄糖醛酸(1)(103.0mmol)溶于100mL乙酰酐中,8滴浓硫酸滴入，反应升温至60℃，继续反应1小时，降至室温，减压浓缩，蒸出乙酸酐至1/4，加人乙醚，白色固体析出，真空干燥得39.3g五乙酰葡萄糖醛酸酐，产率为94.3％。或者，加入催化量的碘替代浓硫酸，在40℃下搅拌反应2小时，采用同样的后处理，得38.4g五乙酰葡萄糖醛酸酯，产率92.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:5.99(d,J＝8Hz,1H),5.46(t,J＝12,8Hz,1H),5.04(t,J＝12,8Hz,1H)，4.94(t,J＝12,8Hz,1H),4.51(d,J＝12Hz,1H)，2.07(s,3H),2.0(s,3H),1.97(s,3H),1.96(s,3H),1.90(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:172.46,169.88,169.50,169.10,168.36,91.01,72.02,71.58,70.26,69.13,21.48,20.88,20.75,20.72,20.70.
2)1,2,3,4-四-O-乙酰基-D-葡萄糖醛酸(3)的制备
在氮气保护下，21g 1,2,3,4-四-O-乙酰基-葡萄糖醛酸乙酸酐(2)(51.94mmoL)溶于150mL四氢呋喃与水的混合溶液(1:1＝V/V),搅拌过夜，减压蒸除四氢呋喃，过滤，真空干燥得18.0g白色固体,产率95.7％.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.47(brs,1H),5.99(d,J＝8Hz,1H),5.46(t,J＝12,8Hz,1H),5.05(t,J＝12,8Hz,1H)，4.95(t,J＝12,8Hz,1H),4.51(d,J＝8Hz,1H),2.07(s,3H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.96(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:169.88,169.50,169.17,168.35,91.01,72.01,71.58,70.26,69.13,20.88,20.75,20.71,20.70.
3)1,2,3,4-四-O-乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(4)的制备
在氮气保护下，19.2g四乙酰-O-葡萄糖醛酸(3)(52.99mmol)溶于200毫升干燥的N,N-二甲基甲酰胺，29.0g碳酸钾(204.32mmol)和12.0g碘甲烷(84.48mmoL)慢慢加入，继续搅拌2小时，倾倒入800g冰水中，剧烈搅拌，过滤，蒸馏水洗涤，滤饼真空干燥得白色固体四乙酰-O-葡萄糖醛酸甲酯19.2g,产率96.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.77(d,J＝8Hz,1H),5.30(t,J＝12,8Hz,1H),5.23(t,J＝12,8Hz,1H)，5.13(t,J＝12,8Hz,1H),4.18(d,J＝8Hz,1H),3,74(s,3H),2.11(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:169.88,169.38,169.15,168.80,166.76,91.31,72.94,71.77,70.09,68.87,53.00,20.75,20.54,20.51,20.44.
4)2,3,4-三-O-乙酰基-α-D-溴代葡萄糖醛酸甲酯(5)的制备
在氮气保护下，将25.6克1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(4)(68.0mmol)溶入120毫升二氯甲烷中，冷却至0℃，滴加150mL 33％HBr的醋酸溶液，此温度下继续搅拌2小时，TLC监测，完毕，加入水稀释，用二氯甲烷萃取，有机层用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析纯化粗品，流动相为石油醚:乙酸乙酯(4::1,V/V)，得白色固体22.7克，产率为83.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.51(d,J＝4Hz,1H),5.44(t,J＝12,8Hz,1H),5.09(t,J＝12,8Hz,1H)，4.73(t,J＝12,8Hz,1H),4.42(d,J＝12Hz,1H)，3,61(s,3H),1.95(s,3H),1.91(s,3H),1.90(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:169.40,169.38,169.20,166.44,85.54,71.89,70.06,69.09,68.24,52.90,20.37,20.22.
5)对硝基苯基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯糖苷(6a)的制备
在氮气保护下，20.8克碳酸银(75.6mmoL)、5.3克(37.8mmoL)对硝基苯酚、催化量的碘(0.3g)分别溶入40mL二氯甲烷，加入分子筛，搅拌10mins，溶有10克2,3,4-三-O-乙酰基α-D溴代葡萄糖醛酸酯(5)(25.2mmoL)10毫升二氯甲烷缓缓加入，滴毕，用锡箔纸包裹反应24小时，加入乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品硅胶柱纯化，用石油醚与乙酸乙酯(5:1,V/V)制备10.0克白色固体，产率88.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.18(m,2H),7.07(m,2H),5.38-5.28(m,4H),4.26(m,1H),3.71(s,3H),2.06(s,3H),2.05(s,3H),2.04(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:169.99,169.34,169.13,166.58,161.02,143.29,125.81,116.58,98.05,72.57,70.56,68.69,20.58,20,59,20.47.
6)对硝基苄基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯糖苷(6b)的制备
如同步骤5)相同操作，用对硝基苯甲醇代替对硝基苯酚，将41.6克碳酸银(151.2mmoL)、11.6克(75.6mmoL)对硝基苯甲醇、催化量的碘分别溶入80mL二氯甲烷，加入分子筛，搅拌10mins，溶有20克2,3,4-三-O-乙酰基-α-D-溴代-葡萄糖醛酸酯(5)(50.4mmoL)20毫升二氯甲烷缓缓加入，滴毕，用锡箔纸包裹反应24小时，加入乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品硅胶柱纯化，用95％乙醇重结晶制备22.1克白色固体，产率93.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.18(d,J＝8Hz,2H),7.45(d,J＝8Hz,2H),5.26(t,J＝4Hz,2H),5.10(t,J＝8,4Hz,1H),5.02(t,J＝16Hz,1H)，4.68(t,J＝16,12Hz,2H),4.06(d,J＝4Hz,1H)，3.73(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:169.97,169.34,169.15,167.08,147.41,144.16,127.58,123.62,99.94,72.57,71.76,71.09,69.64,69.20,52.92,20.43.
7)对甲氧苯基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯糖苷(6c)的制备
如同步骤5)相同操作，用对甲氧基苯甲醇代替对硝基苯酚，在氮气保护下，20.8克碳酸银(75.6mmoL)、5.3克(38.4moL)对硝基苯甲醇、催化量的碘(0.3g)分别溶入50mL二氯甲烷，加入分子筛，搅拌10mins，溶有10克溴代三-O-乙酰基葡萄糖醛酸酯(5)(25.6mmoL)10毫升二氯甲烷缓缓加入，滴毕，用锡箔纸包裹反应16小时，加入乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品硅胶柱纯化，用石油醚与乙酸乙酯(5:1,V/V)制备11.0克白色固体，产率94.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.20(d,J＝8Hz,2H),6.86(d,J＝8Hz,2H),5.20(m,2H),5.04(t,J＝8,4Hz,1H),4.82(t,J＝8Hz,1H)，4.55(d,J＝8Hz,2H),4.00(d,J＝8Hz,1H)，3,80(s,3H),3.75(s,3H),1.99(s,3H),1.98(s,3H),1.97(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:170.12,169.48,169.25,167.33,159.54,129.61,128.43,113.89,98.89,72.61,72.10,71.16,71.16,70.60,69.46,55.29,52.94.20.63.
8)对硝基苄基-β-D-葡萄糖醛酸糖苷(7a)的制备
在氮气环境中，将17.8克对硝基苯基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯糖苷(6a)(40mmol)溶液无水甲醇溶液中，加入4.8克氢氧化锂(200mmoL)，室温搅拌4小时，TLC监控进程，Dowex 50WX树脂加入中和过量碱，过滤，浓缩得对硝基苯基-β-D-葡萄糖醛酸糖苷，用乙醇重结晶得10.7克白色片状的固体，产率85％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ:8.15(m,2H),7.14(m,2H),5.20(d,J＝8Hz,1H),4.06(t,J＝12Hz,1H),3.59(dd,J＝8,6.0Hz,1H),3.56(d,J＝12.0Hz,6.0Hz,1H),3.55(dd,J＝8.0,6.0Hz,1H).
9)对硝基苄基-β-D-葡萄糖醛酸糖苷(7b)的制备
如同步骤8)相同操作，将14.8克对硝基苄基2,3,4-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯糖苷(6b)(30mmol)溶液无水甲醇溶液中，加入3.6克氢氧化锂(150mmoL)，室温搅拌4小时，TLC监控进程，Dowex 50WX树脂加入中和过量碱，过滤，减压浓缩得对硝基苄-β-D-葡萄糖醛酸，用乙醇重结晶得7.4克白色片状的固体，产率75％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.22(d,J＝8Hz,2H),7.72(d,J＝8Hz,2H),6.85(s,1H),5.23(t,J＝4Hz,2H),5.00(t,J＝8Hz,2H),4.74(d,J＝12Hz,1H),4.31(d,J＝8,Hz,1H),3.17-3.07(m,3H).
10)对甲氧苄基-β-D-葡萄糖醛酸糖苷(7c)的制备
如同步骤8)相同操作，将13.6克对甲氧基苄基-2,3,4-O-乙酰基-β-D葡萄糖醛酸甲酯(6c)(30mmol)溶液无水甲醇溶液中，加入1.7克氢氧化锂(150mmoL)，室温搅拌3小时，TLC监控进程，Dowex 50WX树脂加入中和过量碱，过滤，减压浓缩得对甲氧基苄基-β-D-葡萄糖醛酸糖苷，用乙醇重结晶得7.7克白色片状的固体，产率82％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ:7.46(d,J＝8Hz,2H),7.04(d,J＝8Hz,2H),6.85(s,1H),4.90(d,J＝12Hz,1H),4.67(d,J＝12Hz,1H),4.50(d,J＝8Hz,1H),3.87(s,3H),3.71(d,J＝8Hz,1H),3.58-3.44(m,2H),3.34(t,J＝8Hz,1H).13C NMR(100MHz,D2O)δ:176.32,159.48,131.21,129.81,114.69,101.32,76.65,76.26,73.62,72.45,71.53,56.03.
实施例2
1)1,2,3,4-四-O-乙酰基半乳糖醛酸乙酸酐(9)的制备
在氮气保护下，20克β-D-半乳糖醛酸(8)(103.0mmol)溶于100mL乙酰酐中,加入0.2g催化量的碘，在40℃下搅拌反应2小时，，减压浓缩，蒸出乙酸酐至1/4，加人乙醚，白色固体析出，得39.2g五乙酰半乳糖醛酸酯，产率94.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:5.94(d,J＝8Hz,1H),5.64(s,1H),5.38(t,J＝12,3.6Hz,1H)，4.90(t,J＝12,3.6Hz,1H),4.62(s,1H)，2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.98(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:177.32,170.11,169.76,169.69,168.56,89.06,70.42,68.58,67.42,65.33,21.53,20.91,20.73,20.64,20.43.
2)1,2,3,4-四-O-乙酰基-D-半乳糖醛酸(10)的制备
在氮气保护下，21g 1,2,3,4-四-O-乙酰基-半乳糖醛酸乙酸酐(9)(51.94mmoL)溶于150mL四氢呋喃与水的混合溶液(V/V＝1:1),搅拌过夜，减压蒸除四氢呋喃，过滤，真空干燥得18.1g白色固体,产率96.3％.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.31(brs,1H),5.93(d,J＝8Hz,1H),5.63(t,J＝12,8Hz,1H),5.05(t,J＝12,8Hz,1H)，4.96(t,J＝12,8Hz,1H),4.53(s,1H),2.15(s,3H),2.07(s,3H),2.04(s,3H),2.00(s,3H).
3)1,2,3,4-四-O-乙酰基-D-半乳糖醛酸甲酯(11)的制备
在氮气保护下，19.2g四乙酰-O-半乳糖醛酸(10)(52.99mmol)溶于200毫升干燥的N,N-二甲基甲酰胺，29.0g碳酸钾(204.32mmol)和12.0g碘甲烷(84.48mmoL)慢慢加入，继续搅拌2小时，倾倒入800g冰水中，剧烈搅拌，过滤，蒸馏水洗涤，滤饼真空干燥得白色固体四乙酰-O-半乳糖醛酸甲酯18.1g,产率90.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.78(d,J＝8Hz,1H),5.34(t,J＝12,8Hz,1H),5.18(t,J＝12,8Hz,1H)，5.09(t,J＝12,8Hz,1H),4.52(s,1H),3,68(s,3H),2.12(s,3H),2.08(s,3H),2.05(s,3H),2.02(s,3H).
4)2,3,4-三-O-乙酰基-α-D-溴代半乳糖醛酸甲酯(12)的制备
在氮气保护下，将25.6克1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-半乳糖醛酸甲酯(11)(68.0mmol)溶入120毫升二氯甲烷中，冷却至0℃，滴加150mL 33％HBr的醋酸溶液，此温度下继续搅拌1-2小时，TLC监测，完毕，加入水稀释，用二氯甲烷萃取，有机层用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析纯化粗品，流动相为石油醚:乙酸乙酯(4::1,V/V)，得白色固体23.5克，产率为87.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.81(d,J＝4Hz,1H),5.76(s,1H),5.40(t,J＝12,8Hz,1H)，5.13(t,J＝12,8Hz,1H),4.80(s,1H),3.65(s,3H),2.12(s,6H),1.91(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:169.68,169.48,169.26,165.67,87.16,72.28,67.83,67.52,67.11,52.78,20.50,20.27.
5)对硝基苯基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-半乳糖醛酸甲酯糖苷(13a)的制备
在氮气保护下，20.8克碳酸银(75.6mmoL)、5.3克(37.8mmoL)对硝基苯酚、催化量的碘(0.3g)分别溶入40mL二氯甲烷，加入分子筛，搅拌10mins，溶有10克2,3,4-三-O-乙酰基α-D溴代半乳糖醛酸酯(12)(25.2mmoL)10毫升二氯甲烷缓缓加入，滴毕，用锡箔纸包裹反应24小时，加入乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品硅胶柱纯化，用石油醚与乙酸乙酯(4:1,V/V)制备10.1克白色固体，产率89.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.23(m,2H),7.21(m,2H),5.21(d,J＝8Hz,1H),4.30(m,2H),3.92(m,1H),3.83(m,1H),3.66(s,3H),2.13(s,3H),2.07(s,3H),1.99(s,3H).
6)对硝基苄基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-半乳糖醛酸甲酯糖苷(13b)的制备
如同步骤5)相同操作，用对硝基苯甲醇代替对硝基苯酚，将41.6克碳酸银(151.2mmoL)、11.6克(75.6mmoL)对硝基苯甲醇、催化量的碘分别溶入80mL二氯甲烷，加入分子筛，搅拌10mins，溶有20克2,3,4-三-O-乙酰基-α-D-溴代-半乳糖醛酸酯(12)(50.4mmoL)20毫升二氯甲烷缓缓加入，滴毕，用锡箔纸包裹反应18小时，加入乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品硅胶柱纯化，用95％乙醇重结晶制备21.1克白色固体，产率89.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.25(d,J＝8Hz,2H),7.65(d,J＝8Hz,2H),5.23(d,J＝4Hz,2H),4.93(t,J＝8Hz,1H),4.87(t,J＝16,12Hz,1H),4.33(t,J＝16,12Hz,2H),4.06(s,1H),3.69(s,3H),2.12(s,6H),1.98(s,3H).
7)对硝基苄基-β-D-半乳糖醛酸糖苷(14a)的制备
在氮气环境中，将17.8克对硝基苯基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-半乳糖醛酸甲酯糖苷(13a)(40mmol)溶液无水甲醇溶液中，加入4.8克氢氧化锂(200mmoL)，室温搅拌4小时，TLC监控进程，Dowex 50WX树脂加入中和过量碱，过滤，浓缩得对硝基苯基-β-D-半乳糖酸糖苷，用95％乙醇重结晶得11.1克白色片状的固体，产率88.4％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ:8.26(m,2H),7.26(m,2H),5.19(d,J＝8Hz,1H),4.33(m,2H),3.92(dd,J＝12,6.0Hz,1H),3.85(dd,J＝12.0Hz,6.0Hz,1H).13C NMR(100MHz,D2O)δ:174.7,162.4,143.1,126.4,116.8,99.6,75.5,72.3,70.4,70.2.
8)对硝基苄基-β-D-半乳糖醛酸糖苷(14b)的制备
如同步骤7)相同操作，将14.8克对硝基苄基2,3,4-O-乙酰基-β-D-半乳糖醛酸甲酯糖苷(13b)(30mmol)溶液无水甲醇溶液中，加入3.6克氢氧化锂(150mmoL)，室温搅拌4小时，TLC监控进程，Dowex 50WX树脂加入中和过量碱，过滤，减压浓缩得对硝基苄-β-D-半乳糖醛酸，用95％乙醇重结晶得8.1克白色片状的固体，产率81.1％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ:8.28(d,J＝8Hz,2H),7.61(d,J＝8Hz,2H),5.28(d,J＝4Hz,2H),4.95(t,J＝8,4Hz,1H),4.87(m,1H),4.41(m,2H),4.06(s,1H).
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。