提高反季鱼苗成活率的方法.pdf

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1、(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202310507870.7(22)申请日 2023.05.08(71)申请人 中国水产科学研究院珠江水产研究所地址 510380 广东省广州市荔湾区东漖街道西朗兴渔路1号(72)发明人 夏耘刘雅荣杨惠慈王广军谢骏郁二蒙龚望宝李志斐张凯田晶晶李红燕谢文平(74)专利代理机构 北京东方盛凡知识产权代理有限公司 11562专利代理师 李彬(51)Int.Cl.A01K 61/10(2017.01)A01K 61/13(2017.01)(54)发明名称一种提高反季鱼苗成活率的方法(57)摘要本发明公开了。

2、一种提高反季鱼苗成活率的方法，属于水产养殖技术领域。所述方法包括向反季鱼苗中交替投喂饲料A和饲料B的步骤；所述饲料A为向基础饲料中添加黄连素制备而成；所述饲料B为向基础饲料中添加聚羟基丁酸酯制备而成。本发明将分别添加BBR和PHB的两种饲料采用科学的交替投喂策略育苗，不仅提高反季苗种的生长性能和成活率，并均对苗种的肠道、肝脏健康和机体免疫具有显著改善作用，且对水产动物生产性能无不良影响，本发明为鱼苗秋季繁育推广奠定了重要基础。权利要求书1页 说明书8页 附图4页CN 116602242 A2023.08.18CN 116602242 A1.一种提高反季鱼苗成活率的方法，其特征在于，包括向反季鱼。

3、苗中交替投喂饲料A和饲料B的步骤；所述饲料A为向基础饲料中添加黄连素制备而成；所述饲料B为向基础饲料中添加聚羟基丁酸酯制备而成。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述交替投喂的方式为：先投喂饲料A114d，再投喂饲料B114d，交替投喂至成苗。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述交替投喂的方式为：先投喂饲料A7d，再投喂饲料B7d，交替投喂至成苗。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述投喂的次数为2次/d，日投喂量为反季鱼苗体重的35。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黄连素和所述聚羟基丁酸酯的添加量均为1wt。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通。

4、过改善反季鱼苗的肠道和肝脏健康，增强机体免疫，以发挥提高成活率的效果。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反季鱼苗包括于秋季育苗的大口黑鲈苗种。权利要求书1/1 页2CN 116602242 A2一种提高反季鱼苗成活率的方法技术领域0001本发明涉及水产养殖技术领域，特别是涉及一种提高反季鱼苗成活率的方法。背景技术0002大口黑鲈(Micropterus salmoides)是近年来国内淡水养殖明星产品，养殖产量持续增长，产业几乎遍布全国，2021年，全国养殖产量超过50万吨，正逐步演变成为我国“第五大家鱼”。目前，全国兴起了大口黑鲈反季节繁育热潮，在910月投放秋苗，养殖过冬，等到。

5、来年可以在市场商品鱼少的时候上市。反季节苗的繁殖，将为市场提供充足、稳定的苗种，使大口黑鲈养殖行业真正走上高质量发展之路。但由于多方面因素影响，例如大口黑鲈是肉食性鱼类，对糖类的负荷和清除能力极低，长期的人工配合饲料投喂导致大口黑鲈出现严重的“肝胆综合征”，表现为持续高血糖、肝肿大、肝糖原累积、生长率减缓和饲料效率降低；加上近几年大口黑鲈病毒性及细菌性疾病爆发频繁，进一步限制了反季节种苗的成活率。鱼苗整体成活率偏低，反季节大口黑鲈苗种缺口很大，一直处于供不应求状态。0003大口黑鲈配合饲料的前期研究主要关注于营养需求和饲料配方，目的是更好地促进大口黑鲈生长，提高饲料转化效率。配合饲料投喂对大口。

6、黑鲈生长、肌肉营养组成、免疫和消化功能的研究已经广泛开展。直到目前，大口黑鲈配合饲料的研究已转向新的领域，即饲料添加剂的开发。0004黄连素(Berberine，BBR)又称盐酸小檗碱，是从黄连、黄柏等植物中提取出来的生物碱，具有多种重要的生理功能，可有效调节脂肪代谢、改善脂肪肝症状和氧化应激，能促进肠道氨基酸和蛋白质代谢，并且黄连素的添加对于鱼类生长、抗炎及代谢能力有良好的促进作用。0005聚羟基丁酸酯(PHB)是一种细胞内能量和碳储存化合物，在生理压力(如氮耗竭和碳过量条件)下，由富养产碱杆菌和巨大芽孢杆菌等细菌积累。作为一种无毒且可生物降解的聚合物，PHB不溶于水，可能在水生动物的胃肠道。

7、中被生物降解为抗菌SCFAb羟基丁酸或PHB低聚物，这可能会略微降低肠道pH环境，有利于益生菌的生长，研究发现饲料中添加适量的PHB可以促进海鲈和罗氏沼虾的生长并有助于其肠道益生菌群的形成，并表现出了良好的促进水产品的生长性能。0006但是，BBR和PHB能否联用，以及能否应用于大口黑鲈反季秋苗培育中，目前尚未有相关的深入研究报道。发明内容0007本发明的目的是提供一种提高反季鱼苗成活率的方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法可提高反季苗种的生长性能和成活率，并均对苗种的肠道、肝脏健康和机体免疫具有显著改善作用，为鱼苗秋季繁育推广奠定了重要基础。0008为实现上述目的，本发明提供了如下方案。

8、：0009本发明提供一种提高反季鱼苗成活率的方法，包括向反季鱼苗中交替投喂饲料A说明书1/8 页3CN 116602242 A3和饲料B的步骤；0010所述饲料A为向基础饲料中添加黄连素制备而成；所述饲料B为向基础饲料中添加聚羟基丁酸酯制备而成。0011进一步地，所述交替投喂的方式为：先投喂饲料A114d，再投喂饲料B114d，交替投喂至成苗。0012进一步地，所述交替投喂的方式为：先投喂饲料A7d，再投喂饲料B 7d，交替投喂至成苗。0013进一步地，所述投喂的次数为2次/d，日投喂量为反季鱼苗体重的35。0014进一步地，所述黄连素和所述聚羟基丁酸酯的添加量均为1wt。0015进一步地，通。

9、过改善反季鱼苗的肠道和肝脏健康，增强机体免疫，以发挥提高成活率的效果。0016进一步地，所述反季鱼苗包括于秋季育苗的大口黑鲈苗种。0017本发明公开了以下技术效果：0018本发明将分别添加BBR和PHB的两种饲料采用科学的交替投喂策略育苗，不仅提高反季苗种的生长性能和成活率，并均对苗种的肠道、肝脏健康和机体免疫具有显著改善作用，且对水产动物生产性能无不良影响。0019本发明提供的两种饲料是在全面系统的研究基础上形成的，具有广泛的实验基础和科学依据，养殖实践中能够提高苗种成活率，改善肠道、肝脏健康，提高免疫效果显著；本发明添加剂原材料来源广泛，采购方便、易获取，成本较为低廉；饲料制备操作简单，无。

10、需特殊仪器设备；该饲料交替投喂策略简单易行，适用性强，且饲料使用后无残留，对环境友好。0020综上，本发明具有调控大口黑鲈反季秋苗肠道和肝脏健康与机体免疫，以及提高大口黑鲈反季秋苗存活率的作用，为鱼苗秋季繁育推广奠定了重要基础。附图说明0021为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。0022图1为各处理组大口黑鲈肝脏组织HE染色后的显微结构；0023图2为各处理组大口黑鲈后肠组织HE染色后的显微。

11、结构；0024图3为各处理组大口黑鲈肠道菌群偏最小二乘法判别分析；0025图4为各处理组大口黑鲈肠道菌群在门水平分布柱形图；0026图5为各处理组大口黑鲈肠道菌群在属水平分布柱形图；0027图6为各处理组大口黑鲈肠道菌群KEGG pathway分析结果。具体实施方式0028现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。0029应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发说明书2/8 页4CN 116602242 A4明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限。

12、和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。0030除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。0031在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具。

13、体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。0032关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。0033以下实施例中所用的PHB购自麦得发生物科技股份有限公司，为白色粉末状，无味，纯度90。BBR购自北京索莱宝科技有限公司，其含量98，为淡黄色，味苦。下述是指重量千分比。0034本发明的饲料可按1比例和基础饲料中其他原料逐级混均，制成颗粒饲料，也可与商品饲料等拌料投喂使用。0035实施例1大口黑鲈反季秋苗饲料添加剂的制备0。

14、036称取BBR及PHB材料分别进行烘干粉碎，分别过60目筛，即得到本发明的改善大口黑鲈反季秋苗肠道和肝脏健康及机体免疫的饲料添加剂。0037本发明所涉及的增强大口黑鲈反季秋苗机体免疫的饲料添加剂，PHB和BBR在饲料中的添加比率均为1，是基于前期实验结果：饲料中添加1BBR能有效降低大口黑鲈血糖、甘油三酯、胆固醇和肝脂蓄积；饲料中添加1PHB能改善大口黑鲈机体免疫和肠道健康状况。同时考虑到PHB约100元/公斤，BBR价格约400元/公斤，都在水产饲料生产成本可接受范围。本发明采用在饲料中分别添加1PHB和BBR，并将以上两种含不同添加剂的饲料以间隔一周的投喂策略进行交替投喂，获得改善大口黑。

15、鲈反季秋苗机体代谢、免疫和肠道、肝脏健康的制剂及其科学投喂策略，以期在较高性价比的前提下，兼顾以上功能，提高反季秋苗的成活率，产生较高的经济效益。0038实施例2大口黑鲈反季秋苗饲料的制备0039实验以鱼粉、鸡架肉粉、大豆浓缩蛋白为主要蛋白源，制成大口黑鲈实验鱼用基础饲料C。在基础饲料C中添加1的PHB，制成含PHB制剂的饲料P。在基础饲料C中添加1的BBR，制成含BBR制剂的饲料B。在基础饲料C中分别添加PHB制剂和BBR制剂各1，制成含BBR和PHB混合制剂的饲料BP，制作过程将一份单一PHB制剂、一份单一BBR制剂、以及PHB和BBR混合制剂与大口黑鲈基础饲料组分混合均匀搅拌，混合搅拌的。

16、温度控制在2030，混合搅拌的时间控制在1530min；混合搅拌的速率控制在200300rpm之间。这样就能够制备得到均一性的大口黑鲈饲料，使得饲料添加剂与其他饲料成分能够更好的互相融合。详细的饲料配方和营养组分见表1。说明书3/8 页5CN 116602242 A50040表1实验用大口黑鲈饲料配方0041饲料原料饲料C饲料B饲料P饲料BP日本级鱼粉(秘鲁；67cp)470470470470鸡架肉粉140140140140大豆浓缩蛋白90909090豆粕4830303030发酵豆粕50505050高筋面粉45454545木薯生淀粉70707070豆油60606060加州鲈预混料(2)2020。

17、2020L赖氨酸盐酸盐(含量98)3333DL蛋氨酸(含量99)2222磷酸二氢钙15151515氯化胆碱(含量50)5555BBR0101PHB0011合计10001001100110020042实施例30043在广东省广州市珠江水产研究所养殖基地，选用当年人工孵化的同批次大口黑鲈苗作为实验鱼，挑选出规格一致、体格健壮的大口黑鲈苗放养于同一池塘的21个2m2m的网箱中，每个网箱放养300尾，体重为130.340.26mg/尾。整个实验分为7组，即C组(整个实验期间投喂对照饲料)、B组(整个实验期间投喂含单一BBR制剂的饲料B)、P组(整个实验期间投喂含单一PHB制剂的饲料P)、MIX组(每天。

18、投喂含BBR和PHB两种添加剂的饲料BP)、BP5组(饲料B和饲料P分别以每5天的频率交替投喂)和BP7(饲料B和饲料P分别以每7天的频率交替投喂)和BP14组(饲料B和饲料P分别以每14天的频率交替投喂)，每组3个平行，分别投喂实施例2中的4种饲料，养殖实验共进行30天。实验采用池塘自然水体，静水养殖，整个试验周期水温为1519，溶解氧DO为69mg/L，总磷TP为0.190.07mg/L，总氮TN为2.450.39mg/L，NH4+N为0.230.06mg/L，NO2N为0.520.08mg/L，NO3N为0.560.12mg/L，pH为7.20.8，保持在自然光周期下。每天投喂2次(9:。

19、00和16:00)，日投喂量为鱼体重的35，每次投喂前5min停气，人工少量多次投喂，以确保投喂饲料被完全摄食。0044为期30天的养殖实验结束时，将各养殖箱的实验鱼分别称重、取样，实验鱼增重率(WG，)、饲料系数(FCR，g/g增重)、成活率(SR，)的计算公式分别为：0045WG()(FBWIBW)/IBW100；0046FCRFI/(FBWIBW)；0047SRFN/IN100。0048注：FBW为实验鱼终末体重(g)；IBW为实验鱼初始体重(g)；FI为试验期间鱼的摄食量(g)；FN为终末实验鱼数量(条)；IN为初始实验鱼数量(条)。0049如表2所示，与C组相比，P组终末总重、增重率。

20、和成活率均无显著变化(P0.05)，但说明书4/8 页6CN 116602242 A6P组的饲料系数显著低于C组(P0.05)。与C组相比，其余各实验组的终末总重和增重率均显著提高(P0.05)，饲料系数显著降低(P0.05)，并且除了B和P组外，其余各组成活率均显著高于对照组(P0.05)。从综合数据来看，饲料P和饲料B交替使用时获得了比不交替使用或含BBR和PHB混合添加剂的饲料BP更好的效果，当这两种饲料以7天的频率交替使用时效果最优，显著提高了大口黑鲈反季秋苗的生长性能、饲料利用率和成活率。0050表2实验鱼生长性能指标0051组别 初始总重(g)终末总重(g)增重率()饲料系数成活率。

21、()C4047.333.18a18.337.95a7.452.67b 29.773.30aB4059.001.15b47.502.89b2.620.16a 35.780.29abP4056.000.58ab 40.001.44ab3.100.14a 35.890.95abBP54073.332.33c83.335.83cd1.320.04a 41.000.77cdBP74081.676.36d104.1715.90d 1.200.11a 46.675.04dBP14 4070.330.88c75.832.20c1.710.07a 38.110.48bcMIX4057.332.40b48.610。

22、.03b2.900.36a 37.040.03bc0052实施例40053按照实施例3的实验设计，进行30天的养殖实验，实验结束时，禁食1d，用MS222对试验鱼进行轻微麻醉，每组采集12个肝脏样本，于液氮中急速冷冻，转移至80保存备用。0054肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)生化指标，购买南京建成生物工程研究所试剂盒，使用Thermo全波长酶标仪测定。各处理组试验鱼肝脏SOD、ACP、AKP、GOT和GPT活力如表3所示。结果显示，B、P、BP5、BP7、BP14和MIX组大口黑鲈肝脏ACP、AKP和SOD。

23、活性均显著高于C组(P0.05)，并且BP7组和BP14组显著高于B组、P组和MIX组(P0.05)；B、P、BP5、BP7、BP14和MIX组大口黑鲈肝脏GOT和GPT活性均显著低于C组(P0.05)，且BP5、BP7和BP14组显著低于B组、P组和MIX组(P0.05)。说明以上三种饲料的使用均有效降低了大口黑鲈反季秋苗肝脏炎症反应，提高了肝脏抗氧化性能和免疫水平，并且饲料B和饲料P交替使用比不交替使用或使用饲料BP效果更好，其中以7天的频率交替使用时效果最佳。0055表3大口黑鲈肝脏生化指标00560057实施例50058按照实施例3的实验设计，进行30天的养殖实验，实验结束时，禁食1d。

24、，用MS222对试验鱼进行轻微麻醉，每组采集12个肠道样本，于液氮中急速冷冻，转移至80保存备用。0059肠道的GOT、GPT、丙二醛(AMD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)、白介素6(IL6)和肿瘤坏死因子(TNF)生理生化指标，购买南京建成生物工程研究所试剂盒，使用Thermo全说明书5/8 页7CN 116602242 A7波长酶标仪测定。各处理组试验鱼肠道GOT、GPT、AMD、CAT、LZM、IL6和TNF活力如表4所示。结果显示，B、P、BP5、BP7、BP14和MIX组大口黑鲈肠道GOT、GPT、AMD和IL6活性显著低于C组(P0.05)；BP5和BP7组TNF活性显。

25、著低于C组(P0.05)；BP7组GOT、GPT、AMD、IL6和TNF活性显著低于B组、P组和MIX组(P0.05)；B、P、BP5、BP7和BP14组大口黑鲈肠道CAT和LZM活性显著高于C组(P0.05)。图3为不同处理组大口黑鲈肠道菌群偏最小二乘法判别分析(PLSDA)，显示C组和B组以及BP14组部分样本聚在一起，BP5和BP7菌群组成接近，P组、BP14组和MIX组菌群与其他样本分离。说明PHB对大口黑鲈秋苗肠道菌群构成影响较大，当含BBR与PHB的两种饲料以每5天和7天的频率交替使用时对肠道菌群的影响接近。0069表5大口黑鲈肠道菌群 多样性指数0070Chao1AceShann。

26、onSimpsonCoverageC20.537.1644.0011.250.890.270.630.130.940.01B19.423.4542.567.740.980.100.700.040.920.02P23.873.4732.063.091.030.110.590.050.930.00BP523.651.3832.554.731.10.130.550.060.930.01BP724.916.0837.847.751.230.230.510.090.930.01BP1020.944.5436.688.491.300.190.510.070.930.02MIX19.253.9740.551。

27、1.520.970.240.570.120.950.010071图4为各处理组大口黑鲈肠道菌群在门水平分布柱形图，结果显示，门水平主要菌群组成包括Proteobacteria、Firmicutes、Actinobacteriota和Bacteroidota。与C组(Proteobacteria，90.50；Firmicutes，6.07)相比，BP5组、BP7组和MIX组Proteobacteria含量明显降低(66.20、44.86和62.06)，但是Firmicutes含量显著升高(28.50、47.66和19.44)。与C组(Bacteroidota，0.93)相比，各实验组Bacter。

28、oidota的分布增加，其中BP7组Bacteroidota含量(4.98)显著增加。0072图5为各处理组大口黑鲈肠道菌群在属水平分布柱形图，结果显示，与C组(Achromobacter，86.14；Lactobacillus，2.34)相比，BP5和BP7组Achromobacter含量(61.99和43.30)降低，但是Lactobacillus含量(18.22和30.22)显著升高。说明BBR和PHB制剂的使用改变了大口黑鲈反季秋苗肠道主要微生物群落构成，增加了有益细菌Lactobacillus在肠道的分布，当含BBR与PHB的两种饲料以每5天或7天的频率交替使用时效果最好。0073肠。

29、道菌群KEGG pathway分析结果显示(图6)，相比于其他各组，BP7组中功能基因在Metabolism和Environmental informationprocessing通路显著富集，推测BP7组肠道菌说明书7/8 页9CN 116602242 A9群在宿主代谢和营养吸收中发挥重要作用。0074总之，含BBR和PHB的两种饲料以每7天的频率交替使用时能更有效的综合利用BBR对宿主代谢以及PHB对宿主肠道菌群的调控作用，发挥双层作用，显著提高大口黑鲈反季秋苗成活率。0075以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。说明书8/8 页10CN 116602242 A10图1说明书附图1/4 页11CN 116602242 A11图2说明书附图2/4 页12CN 116602242 A12图3图4说明书附图3/4 页13CN 116602242 A13图5图6说明书附图4/4 页14CN 116602242 A14。